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拟南芥Rad23原核重组蛋白构建和活性检测
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Purification of Arabidopsis Rad23 Recombinant Protein in Engineering Bacteria and Preparation of Its Polyclonal Antibody
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    摘要:

    在拟南芥中,Rad23基因通过参与泛素/26S蛋白酶体途径调节植物生长发育和激素应答.为进一步研究该基因编码蛋白的分子作用机制及其生物学功能,构建了pCold-Rad23融合蛋白重组表达载体,将该载体转化到大肠杆菌BL21中诱导表达目的蛋白.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果表明,分子质量为94 ku左右的融合重组蛋白在大肠杆菌中获得高效表达.采用纯化的重组蛋白多次免疫昆明小白鼠的方法,获得了特异性强并且效价高的多克隆抗体,经蛋白印迹检测,在分子质量40 ku左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗血清可以与拟南芥Rad23蛋白特异性结合.

    Abstract:

    Rad23 gene which participates in ubiquitin/26S proteasome pathway in Arabidopsis, is known to play important roles in plant development and responses to hormone. In order to study its function and molecular mechanism, an expression vector pCold-Rad23 was constructed and transformed into E. coli BL21. Then the recombinant fusion protein was induced by IPTG.The results of SDS-PAGE have shown that Rad23 fusion protein existed in a soluble form with a relative molecular mass 94 ku, which is fit for the molecular mass supposed from gene coding frame. Finally, the Rad23 recombinant fusion protein was used as an antigen to prepare polyclonal antiserum in mice. The western blot results have shown that the polyclonal antiserum has high specificity and can react to the native protein expressed in different tissues of Arabidopsis.

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李秀山,刘斌,赵李剑,唐东英,赵小英,刘选明.拟南芥Rad23原核重组蛋白构建和活性检测[J].湖南大学学报:自然科学版,2011,38(11):66~69

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